MSc. David García Nieto
🔬Caso práctico: Tinción de alizarina en peces
Preservar la apariencia externa y fijar coloración en peces óseos y cartilaginosos utilizando un preservante sin formaldehído.
Primero, En las colecciones biológicas de animales vertebrados, no podríamos olvidarnos de uno de los grupos más variados en formas y colores, estamos hablando de los peces. Durante el desarrollo de mi carrera de Licenciatura de Biología en horario de tarde, después de salir de clase teórica o práctica me gustaba pasarme por la colección biológica de peces custodiada por mi profesor de Ictiología, Jesús Matallanas, uno de los profesores más emblemáticos y que sin duda marcaron aún más mi vocación hacia ese grupo de seres incomprendidos que viven en el agua. Justamente, estaba revisando sus frases míticas en el portal DOCSITY, esta plataforma digital se utiliza mucho en mi país, España. Aparte de las frases míticas, también hay apuntes. Pero no me gusta hacer alusión al facilismo.
Aún recuerdo el olor del cuarto de la colección de ictiofauna, muchas de ellas no eran los típicos peces que uno esperaría encontrar en el río local. La mayoría eran especies procedentes del hemisferio sur, concretamente de la Antártida conseguidas de las múltiples expediciones del profe Jesús Matallanas en el Buque de Investigación Oceanográfica Hespérides.
Pero que es lo que pasa cuando se conservan estos peces en formaldehido. Este compuesto es una disolución líquida, mezcla homogénea líquida de formol al 10% diluido en agua destilada, (v/v) = (1/3) 1 parte de formol (25%) y 3 partes de agua destilada (75%).
Aunque este formaldehído resulta económico, la preservación de las muestras deja mucho que desear generando un tono amarillento en las mismas y un olor muy fuerte. No es para menos, el uso del formaldehído puede comprometer la salud de los trabajadores al momento de hacer el recambio, durante el cual se añade agua destilada en los recipientes, esta agua actúa para aclarar la muestra, aunque los resultados no mejoran demasiado. Que problemas puede generar para salud manipular este formol, puede cursar con asma aguda por irritación, Cáncer de Nasofaringe, Linfoma de Hodgkin, Leucemia Mieloide y problemas de esterilidad. Según la Agencia Internacional de investigación en Cáncer IARC y la OMS se considera un carcinógeno tipo I y contamina fuentes de agua.ismo idioma, por lo tanto, eso facilita las negociaciones.
El preservante Recupres es un producto libre de formaldehído
Sin embargo, uno de nuestros mayores secretos para esta preservación es e uso de la Alizarina, es un polvo anaranjado que en contacto con el agua genera un tinte color violeta con un poder de tinción enorme, de ahí que se necesite tan poca cantidad, sólo 0,025 gramos, por lo tanto, se necesita una balanza analítica con esa sensibilidad para que sea preciso. Este proceso de tinción se conoce como diafanización con alizarina. Este proceso se caracteriza por qué las estructuras blandas (epitelios y vísceras) se aclaran hasta tal punto de verse translúcidas, en cambio el tejido conjuntivo duro como el cartílago y el hueso quedan teñidos entre un tono rosado y violeta. Este contraste difiere con el tono amarillento de las muestras de formol. El uso del hidróxido de potasio es clave para disolver los epitelios y permitir que la alizarina empiece a teñir. En nuestro ejemplo, no queremos mostrar el esqueleto teñido, si no mostrar la estructura corporal contrastando un pez cartilaginoso (raya de agua dulce) con 2 peces óseos (pacu y sabaleta).
Materiales para tinción (primer día)
- 5 gr KOH (Hidróxido de potasio)
- Agua destilada (250 ml)
- Alizarina 0,025 gr
- Espátula metálica
- Vidrio reloj (podría utilizarse papel de aluminio también)
- Recipiente vidrio (Frasco Pyrex) 200 mL. Este tamaño es el adecuado para peces desde los 5 gramos hasta los 150 gramos.
- Varilla de vidrio
- Balanza analítica
- Pinzas metálicas
Materiales para aclarado I (segundo día)
- 0,5% KOH (Hidróxido de potasio) 150 ml
- 3% Agua Oxigenada H2O2 2 ml
- Glicerina 50 ml
Materiales para aclarado II (8 días después)
- 0,5% KOH (acuosa) 75 ml
- Glicerina 75 ml
- 3% H2O2 5 ml
Materiales para aclarado III (6 días después)
- 5% KOH (acuosa) 50 ml
- Glicerina 150 ml
Procedimiento Tinción
- En todo momento se utilizará un 2% KOH del volumen de agua destilada para lograr una inmersión total que cubra toda la muestra. A la hora de manipular KOH es importante usar gafas de protección, bata 100% algodón y mínimo guantes de nitrilo. En este caso, nosotros utilizamos guantes de protección de PVC.
- Pesar en la balanza 5 gramos de KOH y mezclar con el agua destilada en el recipiente que lo contiene, utilizar la varilla de vidrio dado el caso. Hemos utilizado
- A continuación, pesamos 0,025 gr de alizarina, para ello introducimos la espátula metálica para ir añadiéndola sobre el objeto de pesaje. Evitar que se mojé la misma,
- Sin embargo, hay que tener mucha precaución, ya que el poder de tinción de la Alizarina es altísimo y las manchas en la ropa no se van.
- A continuación, cogemos con ayuda de las pinzas los peces y los introducimos dentro del recipiente, cuidado con no salpicar.
Procedimiento aclarado I día 2
- Primero es necesario hacer un total de 3 aclarados mínimo en los siguientes días: 2, 8 y 14.
- Pesar en la balanza la cantidad adecuada de KOH y mezclar con el agua destilada en el recipiente que lo contiene, utilizar la varilla de vidrio dado el caso.
- A continuación, añadimos 2 ml de Agua Oxigenada H2O
- Finalmente, añadimos 50 ml de glicerina.
Procedimiento aclarado II día 8
- Primero debemos tener 150 ml de solución acuosa de KOH.
- A continuación, añadimos 2 ml de Agua Oxigenada H2O
- Al final añadimos 50 ml de glicerina.
Procedimiento aclarado III día 14
- Debemos tener 150 ml de solución acuosa de KOH.
- A continuación, añadimos 2 ml de Agua Oxigenada H2O
- Al final añadimos 50 ml de glicerina.
- Este ha sido el último paso, nunca más se necesitará renovar el medio líquido, manteniendo la transparencia. Este ensayo se llevó a cabo el 25 de noviembre del 2019, un año y 2 meses después se realizaron las fotos que aparecen en la imagen.
Lo primero que destacamos son los matices rosados y violetas que se aprecian en los opérculos y en los radios espinosos y blandos de las aletas. En estas zonas la escasa capa de tegumento permite transparentar la alizarina en estas partes. Incluso da el efecto que los peces mantienen la misma conformación. En el ejemplo del pacu observamos que en los laterales del cuerpo hay ciertos pliegues, esto se debe a la ubicación en el recipiente, curiosamente el pez mantiene la contextura blanda, a pesar de la limitación del espacio dada por el recipiente, automáticamente se extiende en la mesa, a diferencia del formaldehido que los peces quedan mucho más rígidos y se dificulta tomar fotos con tan buena posición.
Referente a la raya de agua dulce apreciamos la tinción rosada de las fibras de cartílago con estructura tabicada, similar a un tallo de bambú.
Además del procedimiento seguido, hemos probado las bondades del preservante Recupres® que no genera vapores tóxicos y tiene un buen olor. Por desgracia, la viscosidad del producto impide que se pueda apreciar los detalles de la estructura del pez a través del vidrio, pero una vez extraído los tejidos no presentan daños y se ha notado incluso mejoras relevantes en su apariencia en comparación con el uso del formaldehído. Así que lo recomendamos, para más información puedes consultar su Instagram https://www.instagram.com/recupres?utm_source=qr

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